制備液相色譜法開(kāi)始階段是用大直徑的玻璃管柱在室溫和常壓下用液位差輸送流動(dòng)相,稱(chēng)為經(jīng)典液相色譜法,此方法柱效低、時(shí)間長(zhǎng)(常有幾個(gè)小時(shí))。色譜法的分離原理是:溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí),由于與固定相發(fā)生作用(吸附、分配、離子吸引、排阻、親和)的大小、強(qiáng)弱不同,在固定相中滯留時(shí)間不同,從而先后從固定相中流出。又稱(chēng)為色層法、層析法。
按兩相的物理狀態(tài)可分為:氣相色譜法(GC)和液相色譜法(LC)。氣相色譜法適用于分離揮發(fā)性化合物。GC根據(jù)固定相不同又可分為氣固色譜法(GSC)和氣液色譜法(GLC),其中以GLC應(yīng)用*。液相色譜法適用于分離低揮發(fā)性或非揮發(fā)性、熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。LC同樣可分為液固色譜法(LSC)和液液色譜法(LLC)。此外還有超臨界流體色譜法(SFC),它以超臨界流體(界于氣體和液體之間的一種物相)為流動(dòng)相(常用CO2),因其擴(kuò)散系數(shù)大,能很快達(dá)到平衡,故分析時(shí)間短,特別適用于手性化合物的拆分。
循環(huán)液相色譜技術(shù)的關(guān)鍵是循環(huán)技術(shù)。事實(shí)上,并不是所有的液相色譜儀都能實(shí)現(xiàn)多次循環(huán)。這是因?yàn)椋涸谡麄€(gè)分離過(guò)程中,只有色譜柱部分對(duì)各個(gè)組分進(jìn)行分離,其余流路部分都趨向于使得各個(gè)組分重新混合起來(lái)。這就需要在提高色譜柱分離效率的同時(shí),對(duì)流路系統(tǒng)進(jìn)行優(yōu)化,減小流路系統(tǒng)的死體積,只有這樣才能實(shí)現(xiàn)液相色譜儀的循環(huán)功能。
制備液相色譜按照一次進(jìn)樣量的多少,可以分為3種規(guī)模,即半制備色譜、制備色譜和工業(yè)級(jí)色譜。制備色譜以生產(chǎn)純物質(zhì)為目的,在經(jīng)濟(jì)合理的前提下,規(guī)模越大越好。